질문에 대한 답변이 없으면 기술 지원 팀에 추가 솔루션을 문의하십시오.
지원팀에 문의하기물론 제공합니다! 테스트 목적으로 테스트 용량의 샘플을 제공합니다. 필요한 경우 교체 또는 환불도 제공합니다. 자세한 내용은 영업 전문가 에게 문의하십시오.
ABclonal은 항상 당사의 모든 제품에 대한 최신 정보를 제공합니다. 질문이 있는 경우 자세한 내용은 영업팀에 문의하십시오.
적절한 항체 보관 및 원심분리에 관한 지침은 아래를 참조하십시오.
ABclonal은 증발, 응축 희석, 흡착 및 항체의 농도와 효과에 영향을 미치는 기타 과정을 유발할 수 있으므로 연구자들이 항체 제품을 분주하도록 권장하지 않습니다. 개별 분주량이 작을수록 손실이 커집니다.
네, 개별 제품명을 검색하면 ABclonal 웹사이트에서 출판물을 찾을 수 있으며 이 정보는 지속적으로 업데이트됩니다. 모든 출판물의 편집본도 여기 에서 찾을 수 있습니다.
특정 밴드 확인:
예측 MW 참조: 대부분의 항체 검출 결과는 예측 MW의 10-15% 마진 내에 있습니다. 예상 MW 는 Uniprot 웹사이트(www.uniprot.org) 의 데이터를 참조하십시오 .
검출된 MW가 예측된 MW와 다른 가능한 이유:
1. 표적 단백질에 변형 부위, 즉 당화(Glycosylation)가 있습니다.
2. 표적 단백질이 다른 분자, 즉 다른 단백질과 결합되었습니다.
3. 표적 단백질이 절단되었습니다.
4. 유비퀴틴과 같이 Western Blot에서 잘 나타나지 않는 것으로 알려진 몇 가지 특수 단백질이 있습니다.
5. Di-polymer 혹은 polymer
LAMP1 에는 47kDa 및 120kDA 밴드가 있습니다. 둘 다 특정 밴드로 간주됩니다.
Uniprot 웹사이트( http://www.uniprot.org/uniprot/P11279) 를 방문한 후 우리는 예측 MW가 45kDa임을 발견했습니다.
이 표적은 아래와 같이 많은 당화(glycosylation) 부위를 가지고 있습니다.
따라서 이러한 변형으로 인해 감지된 MW는 예측된 MW보다 클 것입니다. 항상 테스트 결과를 다른 회사와 비교하여 확인할 수 있습니다. Abcam과 Cell Signaling의 결과를 아래에 예시로 사용했습니다.
아래 그림과 같이 ATG5의 테스트 결과를 예로 들어보시기 바랍니다.
ATG5 의 예상 MW는 32kDa입니다. ATG5는 당화(glycosylation)를 겪지 않습니다. 그러나 ATG5 단백질은 ATG12와 결합하여 안정적인 단백질 복합체를 형성할 수 있습니다.
이 정보에 따르면 감지된 밴드의 MW는 ATG5+ATG12라는 결론을 내릴 수 있습니다. 아래 그림과 같이 다른 회사의 테스트 결과를 참조할 수 있습니다. 이러한 데이터를 고려하여 ATG5의 55kDa 밴드가 특정 밴드입니다.
아래의 LTF 단백질 테스트 결과를 참조하십시오. 예상 MW는 78kDa이지만 결과는 약 50kDa입니다.
테스트 결과에 대해 의문이 있고, Uniprot 웹 사이트에서는 관련 데이터를 찾을 수 없습니다. 그러나 우리는 LTF 단백질이 50kDa와 30kDa의 두 밴드로 가수분해될 수 있음을 발견했습니다. 따라서, LTF의 검출된 밴드는 특정 밴드였습니다(이 단백질은 대체 프로모터 사용에 의해 생성된 2개의 이소형을 가지고 있습니다. 인간 LTF는 온화한 트립신 소화(PMID:3790094)에 의해 30kDa의 Mr를 갖는 N-말단 트립신 단편과 50kD의 Mr를 갖는 C-말단 트립신 단편, 이렇게 2개의 단편으로 절단될 수 있습니다.
예. ABclonal의 항체에는 thiomersal(0.01% w/v 농도)이라는 비단백질 방부제가 포함되어 있습니다. 미생물 억제제로 작용하여 미생물 오염을 방지합니다.
단백질은 고농도(1 mg/mL 이상)에서 분해될 가능성이 적습니다. 이것이 BSA 또는 기타 유사한 단백질이 종종 항체에 안정제로 첨가되는 이유입니다. 또한 첨가된 단백질은 또한 시험관 벽에 흡착하여 항체의 손실되는 양을 줄일 수 있습니다. 그러나 단백질을 이용하여 안정화된 항체는 표지나 태그로 사용할 수 없습니다. 추가된 단백질은 표적에 결합할 때 항체와 경쟁합니다.
일부 회사는 또한 항체를 보존하기 위해 NaN3를 추가합니다. 그러나 그 특성으로 인해 NaN3를 포함하는 항체는 다음과 함께 사용할 수 없습니다.
1. 살아있는 세포를 이용, 또는 살아있는 세포를 염색하거나 생체 내 실험을 수행하는 경우. NaN3는 미생물을 억제하는 동시에 미토콘드리아 사이토크롬 전자 전달 시스템을 차단하기 때문에 대부분의 다른 유기체에 독성이 있습니다. 반면에 thiomersal은 유기체에 독성이 없습니다.
2. 아미노 그룹의 화학 물질과 결합하는 경우. NaN3가 결합을 방해하기 때문에 NaN3는 커플링 공정 후에만 방부제로 첨가될 수 있지만, 0.01% thiomersal은 1차 아민이 없기 때문에 전체 공정 동안 존재할 수 있습니다.
맞춤 항체를 생산하는 데 일반적으로 15주에서 17주가 소요됩니다. ABclonal의 프로토콜은 다음과 같습니다: 복제(Cloning) -> 발현(Expression) -> 면역화(Immunization) -> 친화성 정제(Affinity Purification) -> 검사(Testing).
복제: 프로젝트 보고서에 따라 발현 벡터 템플릿을 선택합니다. 발현 벡터를 확인하기 위해 클론을 시퀀싱합니다. 이 프로세스를 완료하는 데 약 2주가 소요됩니다. 고객은 자신의 템플릿(15+μL) 및 시퀀싱 결과를 제공할 수 있는 옵션이 있습니다. 이 경우에 시간을 절약할 수 있습니다.
발현: 우리는 우리가 찾는 벡터의 발현을 유도하기 위해 원핵생물을 사용합니다. 2주가 소요됩니다. 고객은 시간을 절약하기 위해 표현식 벡터와 참조 차트를 제공할 수 있습니다.
면역화: 면역화 프로토콜을 실행하는 데 68일이 걸립니다. 토끼는 4번의 면역화 과정을 거치고 마지막 면역화는 최고 수준의 항체를 개발하는 데 중요한 역할을 합니다. 고객은 시간 제약이 있는 경우, 목적을 위해 세 번째 면역화 과정 후 항혈청을 테스트할 수 있습니다.
친화성 정제: 당사의 맞춤형 항체는 거의 항상 1.0 mg/mL 이상의 농도로 존재합니다. 1:1000으로 희석하면 항체는 10ng의 항원을 검출할 수 있습니다. 이 과정은 약 3주가 소요됩니다.
검사: 항체 검사에는 약 3주가 소요됩니다. 그런 다음 약 10 일 동안 정제합니다. 고객이 원하면 내인성 테스트를 위해 테스트 샘플을 보낼 수 있습니다. 동시에 항원 검사를 진행할 수 있습니다.
ABclonal의 맞춤형 항체는 항원 검출을 보장합니다. 항체가 발현 프로토콜에 의해 개발되면 1:1000으로 희석할 수 있으며 10ng의 항원을 검출할 수 있습니다. 항체가 펩타이드 프로토콜을 사용하여 개발된 경우 Dot-Blot에서 1:1000으로 희석할 수 있으며 100ng의 항원을 검출할 수 있습니다.
참고: 고유한 특성으로 인해 감지할 수 없는 몇 가지 항원이 있습니다.
참고: 내인성 테스트의 가변성으로 인해 이 결과를 보장할 수 없습니다./ 그러나 우리는 위험을 분담할 것입니다. 내인성 테스트가 실패하고 ABclonal이 데이터를 검토하고 실험실 구성원과 협력한 후에도 문제를 성공적으로 해결할 수 없는 경우 50%만 청구합니다!
5년 이상의 맞춤형 항체 프로젝트 데이터를 분석한 결과, 발현 경로를 사용한 성공적인 내인성 검출 확률은 70-80%이고 펩타이드 경로는 60-70%입니다.
단클론항체를 사용해야 합니까? 아니면 다클론항체를 사용해야 합니까?
단클론항체는 단일 B 세포 클론에 의해 생성되며 매우 균일하며 하나의 특정 에피토프만을 표적으로 합니다. 하이브리도마 기술은 일반적으로 단클론항체를 제조하는 데 사용됩니다. 다클론항체는 다양한 B 세포에서 생성되는 단클론항체의 혼합물입니다.
이에 비해 각각의 단클론항체는 에피토프 인식 부위가 하나밖에 없기 때문에 일반적으로 특이성이 강한 편이나 에피토프가 차단되거나 파괴되면 결합력을 잃게 됩니다. 따라서 IP, Co-IP 및 ChIP와 같은 단백질 농축 실험에는 적합하지 않습니다. 반면, 다클론항체는 여러 인식부위를 가지고 있어 하나의 에피토프 부위가 차단되거나 파괴되더라도 결합력이 있습니다. 그러나 이는 다클론항체가 상대적으로 약한 특이성을 갖는다는 것을 의미하기도 합니다.
| 항체 카테고리 | 다클론항체 | 단클론항체 | |
|---|---|---|---|
| 항원 범주 | 폴리펩타이드 | 단백질(단편) | 폴리펩타이드, 단백질(단편) |
| 특성 | ++ | ++ | +++ |
| 에피토프 | ++ | +++ | ++ |
| 준비기간 | 3-4 개월 | 5-7 개월 | |
| 초기 준비 비용 | ++ | ++++ | |
| 준비 비용 | ++ | + | |
| 배치 내 일관성 | 불확실성 | 완벽한 일관성 | |
예, 진단이 아닌 연구 목적으로만 사용됩니다.
예, 하지만 항체가 해당 특정 어플리케이션에 대해 테스트되지 않았기 때문에 항체가 해당 어플리케이션 또는 종에 대해 작동하지 않을 수 있는 위험이 있습니다.
ABclonal은 다클론항체의 구성이 비교적 복잡하기 때문에 재사용을 권장하지 않습니다. 재활용 후 효과적인 에피토프가 크게 감소하여 배경이 어둡거나 비특이적 현상이 발생합니다. 그러나 연구자들이 제품 재사용을 선호한다면 재활용 후 소량의 새로운 항체를 추가할 수 있습니다.
단클론항체는 일반적으로 에피토프 인식 부위가 하나뿐이므로 여러 번 재활용할 수 있습니다. 이것은 재활용이 효율성이 아닌 농도 감소로 이어질 것임을 의미합니다.
